Flowcytometry là kỹ thuật có khả năng đo được các công năng huỳnh quangquang họccủa một tế bào đối chọi hoặc những hạt như vi sinh vật dụng, nhân cùng lây truyền sắc đẹp thể được chuẩnbị trong hỗn hợp lỏng khi bọn chúng đi qua 1 nguồn sáng sủa. Các thiết bị flow cytometrytrước tiên là một trong thứ đối chọi thông số (single-parameter) chỉ được áp dụng đểphạt hiện size của tế bào. Lúc bấy giờ, những vật dụng với độ phức tạp cao cókỹ năng phạt hiện nay bên cạnh đó 14 thông số đang được cải cách và phát triển. Nguim tắc cơ bảncủa kỹ thuật này tương quan tới ánh nắng tán xạ với ánh sáng huỳnh quang quẻ phát ra,được tạo ra vày mối cung cấp sáng kích say đắm (thường xuyên là chùm tia laze). Các thông sốnhận được rất có thể là lên tiếng quý hiếm về các chi tiết hóa sinc, sinch lý cùng phântử của phân tử. Ánh sáng sủa tán xạ vào nghệ thuật có liên quan trực tiếp cho tới các đặcđiểm kết cấu với hình hài học tập của tế bào, trong những lúc kia, tia nắng huỳnh quangbao gồm bắt đầu từ bỏ các đầu dò ghi lại huỳnh quang, tỉ lệ thuận cùng với lượng đầu dòhuỳnh quang gắn vào tế bào và những thành phía bên trong tế bào. Có nhì loại flowcytometry khác nhau là non-sorting (ko phân loại) cùng sorting (phân loại).

Bạn đang xem: Flow cytometry là gì

quý khách đang xem: Flow cytometry là gì

FASC (Flourescent activated cell sorters) là các sản phẩm công nghệ đếm tế bào theo chiếc chảycó chức năng phân nhiều loại các nạm bào được khắc ghi huỳnh quang đãng từ 1 hỗn hợp cácquần thể tế bào. Trước tiên, những phân tử sẽ được mang tới đèn Laser trong mộtcái hóa học lỏng. Bất kỳ hạt hài hòa hoặc tế bào làm sao gồm kích cỡ từ bỏ 0.2-150 µmphần đông phù hợp; những tế bào từ bỏ những mô rắn phải được sa thải trước lúc đối chiếu.khi những phân tử trải qua tia laze, bọn chúng tán xạ ánh sáng laze, tia nắng tán xạ cùng ánhsáng huỳnh quang sẽ được thu trên thấu kính tại địa chỉ phù hợp. Sự kết hợp giữaphần tử bóc tách chùm tia và các kính lọc sẽ hướng ánh nắng tán xạ với tia nắng huỳnhquang đãng tới detector; sau cùng những detector sẽ tạo ra biểu lộ điện tỉ lệ thành phần thuậnvới biểu thị quang học tập. Cácnhân tố thiết yếu của dòng sản phẩm flow cytometer (đếm tế bào theo cái chảy) cùng cellsorter (phân loại tế bào) gồm những: hệ hỗn hợp, khối hệ thống quang quẻ học (ánh sángkích mê thích và bộ thu ánh nắng kích thích), mạng lưới điện (detector) cùng một máytính. Hệ thống dung dịch bao gồm trách rưới nhiệm điều phối cái hỗn hợp đựng các hạttới nguồn sáng sủa. Hệ thống quang học kích thích hợp vẫn tập trung mối cung cấp sáng sủa tới các tếbào/ những phân tử, còn khối hệ thống quang quẻ học thu thừa nhận đang gửi những ánh nắng tán xạ hoặcánh nắng huỳnh quang tới màng lưới điện tử. Mạng lưới điện sẽ phát hiện tín hiệuvà chuyển những biểu đạt thành những công bố số tỉ lệ thuận với độ mạnh ánh sángvà máy tính xách tay đã đối chiếu các ban bố này. Kỹthuật flow cytometry được sử dụng rộng thoải mái trong nhiều vận dụng nhằm mục tiêu phân phát hiệnnhững chống ngulặng màng, tế bào chất và nhân. Hình như, toàn cục tế bào cùng các thànhphần tế bào nlỗi bào quan tiền, nhân, DNA, RNA, truyền nhiễm sắc thể, cytokines, hooc môn vàprotein có thể được vạc hiện nay trải qua nghệ thuật này. Việc phân tích những quátrình trong tế bào với chu trình tế bào dựa vào Việc đo lượng calcium với năng lượng điện thếmàng cũng là một trong các vận dụng của flow cytometry. Bài viết dưới đây sẽtrình bày kỹ rộng về những yếu tố của một lắp thêm flow cytometry. Hệthống hỗn hợp có vai trò đi lại những tế bào trong một dung dịch trải qua thiếtbị để thu được những dữ liệu, khối hệ thống này bao gồm 2 thành phần: sheath fluid (dònghỗn hợp bảo vệ/ cái dung dịch bên ngoài) với pressurized line (mẫu áp suất).Sheath fluid là 1 dung dịch trộn loãng (thông thường là đệm PBS- phosphate-bufferedsaline), được tiêm vào phòng flow nằm ở vị trí trung vai trung phong của lắp thêm vị cái áp suất.Một áp suất không khí cũng được tiêm vào những tế bào đã làm được hòa hợp vào ống mẫuvào phía bên trong phòng flow. Dòng mẫu sẽ được chuyển vào lõi trung trọng điểm nhưng mà xung quanglà dòng hỗn hợp bảo đảm an toàn cùng đổi mới loại lõi (core fluid- một mẫu cực kỳ bé chỉđể từng tế bào hoặc từng phân tử đi qua), được tạo thành dựa trên sự khác hoàn toàn áp suấtgiữa loại dung dịch bên ngoài (sheath fluid) cùng cái mẫu (sample fluid), từ bỏ đógiúp triệu tập tế bào/phân tử bao gồm trong mẫu mã thành mẫu tế bào đơn để trải qua chùm tiatia laze. Do đó, quy trình này chất nhận được phát sáng đồng các từng tế bào đề xuất được gọilà quy trình triệu tập thủy đụng lực học tập (hydrodynamic focusing).

Xem thêm: Nghĩa Của Từ Hepatomegaly Là Gì Về Triệu Chứng Gan To (Hepatomegaly) ?


*

Tỷlệ đưa các tế bào vào chùm tia Laser rất có thể được thực hiện dựa vào hệ thống thứ flowcytometer
dựa vào mục tiêu của phân tích. lấy một ví dụ, tỉ lệ mẫu tan cao thường sửdụng mang đến câu hỏi giám sát như immunophenotyping ngơi nghỉ tế bào động vật hoang dã gồm vú, trong khikia, tỉ trọng loại tung phải chăng hay mê thích phù hợp với các áp dụng những hiểu biết độ phân giảicao như so với yếu tắc DNA. Các thông số đặc trưng cần thiết thu được nhờsự tiếp xúc những phân tử với chùm tia laze nhờ vào vào chuyển động buổi tối ưu của các hệthống hỗn hợp. Do kia, cần phải bảo vệ rằng không có sạn bong bóng khí với các mảnhvụn trong hệ thống này để áp lực đang đồng phần lớn sinh sống phần đông thời hạn. Hệthống quang quẻ học tập vào sản phẩm flow cytometry làm cho trách nhiệm chiếu tia nắng kích thíchbao hàm đèn laze, thấu kính với phần tử thu ánh sáng. Thấu kính bao gồm phương châm địnhhình và triệu tập chùm tia laze. Ánh sáng sủa Laser được tạo ra bằng cách kích thíchcác năng lượng điện tử (electron) đã ở tâm trạng cơ bạn dạng lên tâm lý kích đam mê gồm mứcnăng lượng cao nhờ điện áp, sau một thời gian ngắn thêm (thường là 10-7 –10-8 giây), các năng lượng điện tử đang trsinh hoạt về tâm lý cơ bản và vạc ra nănglượng bên dưới dạng các photon ánh sáng. Sau Lúc tia laze chiếu vào tế bào, đầy đủ ánhsáng bị chệch hướng đối với đường tryền thẳng do gặp mặt bắt buộc đồ dùng cản trở được hotline làánh sáng tán xạ. Có nhị nhiều loại ánh sáng tán xạ là forward scatter (FSC) và sidescatter (SSC). Các yếu tố ảnh hưởng đến sự tán xạ ánh nắng là màng tế bào,nhân, những hạt của tế bào, hình trạng cùng mặt phẳng tế bào. Nhìn thông thường size củatế bào hoặc của một hạt và độ tinh vi bên phía trong tế bào được quánh hiệu vị loạitán xạ. Ánh sáng sủa FSC là tác dụng của sự việc nhiễu xạ nhận được dọc theo trục của chùmtia cho tới laze. FSC tỉ trọng cùng với diện tích S mặt phẳng hoặc kích thước tế bào cùng phù hợpđể phạt hiện nay, tách biệt những hạt về size, thường thực hiện phổ biến trongimmuophenotyping. Còn ánh nắng SSC bao hàm số đông các ánh nắng khúc xạ cùng nhiễuxạ, được thu ở góc 90o so với chùm tia cho tới tia laze. SSC tỉ lệ với thànhphần các phân tử hoặc độ tinh vi bên phía trong tế bào. Dường như, tia nắng huỳnhquang gồm nguồn gốc từ bỏ phòng thể hoặc dye đánh dấu huỳnh quang quẻ như là PI cũng đượcphản xạ tại cùng một góc cùng với SSC.
*

Hình 2: Ánh sáng sủa tán xạ (lightscattering). FSC tỉ lệ cùng với size, trong những lúc kia SSC tỉ lệ thành phần cùng với các thành phầnvà độ phức hợp phía bên trong tế bào. Cókhông hề ít cấu hình Laser trong lắp thêm flow cytometer
dựa trên loại hóa học huỳnh quangđược kích mê say. Đèn argon laze (một đèn laze thường thì với bước sóng kíchưng ý 488 nm) được sử dụng để kích mê say những dye tổng hòa hợp nhỏng fluoresceinisothiocyanate (FITC) với dye huỳnh quang quẻ tự nhiên và thoải mái như tảo và phytoplankton. Rấtcác thứ flow cytometer với sorter gồm thêm đèn tia laze có chức năng kích thích chấthuỳnh quang quẻ sinh sống bước sóng kích say mê ở dải sóng UV (300-400nm) hoặc red diodekích thích hợp hóa học huỳnh quang ngơi nghỉ dải sóng đỏ (630 nm). Hệthống thu thừa nhận ánh nắng tất cả thấu kính nhằm thu ánh sáng phân phát ra từ bỏ sự tương tácgiữa chùm tia laze và hạt; một hệ thống gương và kính lọc để tách với tiếp đến hướngtia nắng có bước sóng sệt hiệu mang lại detector thích hợp.